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三代建库测序—单分子实时测序，数据极致便捷。
第三代测序技术是指单分子实时测序技术，也叫从头测序技术。与前两代测序技术相比，其最大的特点就是单分子测序，测序过程无需进行PCR扩增，实现了对每一条DNA/RNA分子的单独测序。诺禾致源为客户提供的三代建库和测序服务，均使用官方指定、主流期刊认可的建库和PacBio 或 Nanopore 原装试剂盒。
应用方向
- 在动植物，微生物，医学等多个领域，在基因组测序、转录组测序、甲基化研究和突变鉴定等方向得到广泛的应用，解决了众多以往无法解决的科学难题，将科学研究引领到一个前所未有的新高度。
诺禾优势
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1. 多样化建库类型
诺禾致源拥有DNA文库和RNA文库，DNA文库又分为PacBio文库和Nanopore文库。 测序平台可以提供PacBio sequel II、PacBio sequel IIe、PacBio Revio和 Nanopore PromethION 48 四种选择，可为客户提供多种测序读长和数据量选择。 -
2.物种经验丰富
从PacBio sequel平台引进起，三代平台实验团队已积累5年测序经验。 -
3.专业的生产团队和高效的运营团队
保证客户项目周期和数据质量，为客户提供快速简单的测序服务。19D+
建库测序Clean data
数据类型
送样建议
| 文库类型 | 样本总量（单次建库） | 样本浓度（Qubit） | 长度要求 |
|---|---|---|---|
| PacBio Revio/sequel II/sequel IIe ccs文库 | ≥5 μg | ≥80 ng/μL | 片段大小在30 Kb以上 |
| PacBio sequel II/sequel IIe clr文库 | ≥7 μg | ≥80 ng/μL | 片段大小在30 Kb以上 |
| Nanopore Ultr-long文库 | ≥45 μg | ≥55 ng/μL | 片段大小在50 Kb以上 |
| Nanopore 普通文库 | ≥8 μg | ≥100 ng/μL | 片段大小在30 Kb以上 |
| RNA文库 | ≥5 μg | ≥300 ng/μL | RIN≥8 |
常见问题
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1. 三代测序准确率如何?
- 三代测序的碱基错误率是随机产生的，通过增加测序深度，能够迅速提升准确性（一般覆盖到10X以上，正确率可以达到99.9%）；无测序偏好性：可以最大程度上还原基因实际情况； 三代DNA reads平均读长大于10kb，具体产出情况与文库构建相关，可以比较均匀的覆盖参考基因组，明确比对到相应区域，避免假阳性的同时，得到更加准确的变异位点和类型。
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2. PacBio 平台的产出情况如何？
- 目前的 PacBio Sequel Ⅱ 平台 CLR 模式单张芯片产出在100-150 G 之间，CCS 模式产出大概在250-300 G 之间，具 体的产出与文库质量、文库大小相关。一般de novo项目文库类型为CLR-20K、CLR40K、CCS-15K，CLR模式平均读长在10-20K，subreads N50长度在20-30K之间。CCS模式 平均读长在10-15K，subreads N50长度在10-15K之间。
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3. CLR 和 CCS 的区别在哪？
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CLR的插入片段长，对文库的测序 ＜2 passes (从接头读到接头)，这样的 reads 测序错误率等同于原始的测序错误率，主要用于基因组 de novo 时的大片段文库测序，一般插入片段大小
＞15K；CCS的插入片段短，对文库的测序 ≥ 2 passes，将相同的 subreads 整合后产生的 CCS reads 准确率会有显著的提升，可用于全长转录组、全长16s、变异检测等较小片段文库测序
，一般插入片段大小在 10K 左右。
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CLR的插入片段长，对文库的测序 ＜2 passes (从接头读到接头)，这样的 reads 测序错误率等同于原始的测序错误率，主要用于基因组 de novo 时的大片段文库测序，一般插入片段大小
＞15K；CCS的插入片段短，对文库的测序 ≥ 2 passes，将相同的 subreads 整合后产生的 CCS reads 准确率会有显著的提升，可用于全长转录组、全长16s、变异检测等较小片段文库测序
，一般插入片段大小在 10K 左右。
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4. Nanopore 平台的产出情况如何？
- 目前 PromethION 平台单张芯片普通DNA文库产出能稳定在 60G，最高可到 100G 以上。一般 de novo 项目文库下机数据的平均读长在 15-20K，read length N50 在 30-40K。对于 Ultra-long reads 文库，其平均读长可达到30-40K，read length N50 更能达到 60K 以上，产出大概在 40G 左右。
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