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质谱分析

常见问题

  • Q:哪些样本可用于蛋白质芯片?

    血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液等常见样本均可。
    除了这些常见的样品,使用蛋白质芯片检测成功的特殊样品还有尿液、眼泪、唾液、痰、脑脊液、前列腺液、腹腔注射液、奶水、初乳、支气管肺泡灌洗液、脓肿液、中耳液、血小板释放物、骨头裂解液、精浆液、卵泡液、囊泡液等。
    目前有发表文献测试过的组织裂解液有肺、支气管、子宫内膜组织,肝脏组织,宫颈肿瘤、脾、脑组织,宫颈组织、囊肿组织等。
  • Q:如何收集蛋白质芯片的样本?

    血清:收集全血至普通离心管或者采血管(不含抗凝剂、防腐剂或者分离剂),室温放置30~45 min,以 3,000~5,000 rpm/min 离心 10 min,取上清检测或者冻存(-80℃)。
    血浆:收集全血至 EDTA、肝素、或者枸橼酸钠等处理的真空采血管,以 3,000~5,000 rpm/mL 离心 10 min,取上清检测或者冻存(-80℃)。
    尿液:收集不添加稳定剂的尿液样本,高速离心样本(如 10,000 离心 1 min 或 5,000 离心 2 min),取上清分装,利用干冰或甲醇浴使样本迅速结冻,储存于 -80℃备用。
    细胞上清(条件培养基):血清中含有部分细胞因子,所以建议制备无血清或低血清条件培养基。例如,于培养皿或培养板中加入完全培养基,接种细胞;细胞贴壁后,加入含药物的6~8 mL 无血清或低血清(低于 2% 胎牛血清)培养基作用细胞;待药物作用时间点到达时,确保细胞融合度达到 90% 以上,收集培养上清于 15 mL 离心管中,2,000 rpm、4℃离心 10 min,收集上清,分装于 1.5 mL EP 管,储存于 -80℃中。对于细胞上清的检测,不同组之间需要接种同样数量的细胞、加入同样体积培养基,培养同样时间后收集样品。
    细胞裂解液:待药物作用时间点到达时,确保细胞融合度达到 90% 以上(数量约为106~108),将上清吸掉,用 PBS(4℃)清洗 2 次细胞,加入 150~200 μL 细胞裂解液(或者参照您购买的裂解液说明书),快速将细胞从培养板刮下,收集细胞裂解液,加入微量离心管中,冰浴 30 min,期间每 10 min 使用涡旋器涡旋 30 s。或者吸弃上清,用 PBS 洗涤细胞 2次后,加入 PBS 刮落细胞,收集于离心管中,2,000~3,000 rpm 4℃离心 10 min,弃上清。加入 100~150 μL 细胞裂解液,冰浴 30 min,期间每 10 min 使用涡旋器涡旋 30 s。14,000 rpm 4℃离心混合液 10 min,吸取清澈上清于干净的离心管中(确保只吸取上层清澈细胞上清,如果上清出现絮状或者浑浊,将细胞裂解液上清转入干净的离心管中,于 14,000 rpm 4℃再次离心 15~20 min 后取上清)。建议裂解蛋白浓度至少 2 mg/mL 以上,上样时稀释倍数约 5~10 倍,上样浓度建议为 500 μg/mL。
    组织裂解液:将组织切成小块,转移至 2 mL 离心管,建议 100 mg 组织加入 500 μL 裂解液(或者参照您购买的裂解液说明书),使用研浆机将组织打碎,冰浴 14,000 rpm 4℃离心混合液 15~20 min,将上清转入干净的离心管中(确保只吸取顶层清澈上清,如果上清出现絮状或者浑浊,将上清转入干净的离心管中,14,000 rpm 4℃再次离心 15~20 min 后取上清)。
  • Q:蛋白质芯片有哪些类型?

    蛋白质芯片所涉及的领域和方向非常多,部分方向可参考下表。

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