PCR产物测序

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PCR产物测序

产品介绍

PCR产物测序

基于 ONT 单分子长读长平台的 PCR 产物精准测序解决方案。依托纳米孔实时测序技术，无需片段化、无需复杂建库，可直接对 PCR 扩增产物进行全长序列读取，高效克服高 GC、重复序列、发夹结构等传统测序难点，提供从样本到高精度一致序列、可视化质控报告的一站式专业服务。

应用方向

PCR 扩增产物全长序列精准解析
单倍型分析

诺禾优势

极速交付：依托长读长测序原理，最快可在12小时内完成从样本到分析报告的全程交付。
无惧复杂：超长读长直接跨越质粒中高GC、重复序列等复杂区域，实现一次性完整测通。
无需引物：单分子测序无需预先设计合成引物，简化实验流程，显著节省时间与引物成本。
交付全面：除一致性序列外，同步提供覆盖度图、突变列表及原始数据等全方位结果，分析更直观。
性价比高：单次反应即可获得全长序列，显著节省时间与成本。

信息分析

送样建议

1）PCR产物样本
浓度：Qubit 定量≥10ng/μl，电泳可见明显条带；
用量：体积≥20μl，总量≥200ng；
纯度：OD260/280=1.8-2.0，OD260/230=2.0-2.2，不含去污剂、盐、蛋白等杂质；
溶解液：用超纯水（双蒸水 / Milli-Q），勿用 TE 缓冲液（影响测序效果）。
2）样本打包和寄送建议
核酸样品建议使用1.5ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口，冰袋运输。

常见问题（FAQ）

1.纳米孔测序与Sanger测序相比有哪些优势？
- 读长长：单条读长可覆盖完整质粒（最长可达数十kb），无需拼接。
  检测范围广：可识别结构变异、多聚体、重复序列、混合样本。
  无偏好性：无扩增建库减少序列偏好性，更反映真实样本组成。
  信息丰富：除序列外，还可提供深度、覆盖度、突变频率等多维度数据。
2.如何判断测序结果是否可靠？
- 查看覆盖度图：深度应均匀，无明显缺口或尖峰。
  查看突变列表：高频突变（>30%）在非Poly区域通常可信。
  查看片段长度分布图：应有明确主峰，且与预期长度一致。
  查看 .ab1 色谱图：峰形应连续、清晰，无明显杂峰。
3.单倍型分析适用于哪些样本？如何解读结果？
- 适用样本：杂合二倍体样本（如某些基因型验证、群体遗传分析）。
  结果文件： .haplotype1.fasta / .haplotype2.fasta：两个单倍型序列。
  ○.AF.violin.png：突变频率分布图，可判断杂合程度。
  ○.consensus.fasta：仅供参考，实际分析应以单倍型文件为准。
4. 什么情况算“测序失败”？主要原因有哪些？
- 对于质粒测序，“失败”意味着您的样本没能产生足够数量和质量的数据，无法组装出靠谱的一致性序列。我们价格实惠、周期短，所以不包含对失败原因进行深度排查的服务。但根据经验，失败最常见的原因就两个：
  1.样本DNA浓度不够：
  这通常是因为用了Nanodrop来定量DNA。Nanodrop容易受杂质干扰导致数值虚高，强烈建议使用Qubit或同级别的荧光染料法进行定量。
  2.样本太杂：
  比如混有多种质粒，或者污染了大量的基因组DNA片段，或者质粒本身已经断裂了。
  怎么发现？看看原始读长长度分布图，如果读长长度分布范围非常宽，不成峰，可能就是样本太杂。
  为了确保最好的测序效果，请一定按照我们推荐的样本送样建议来操作。