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单细胞测序

数据展示

  • 诺禾致源使用Oxford Nanopore的单细胞全长转录组工作流程进行实验,以下是部分项目经验展示:

    1.基础数据展示

    下表展示了人的组织样本基于Nanopore PromethION平台测序 1 Cell后的基础数据,下机数据产出与官方数据呈现水平相当,表明样本测序质量良好。 表一 人组织样本单细胞Oxford Nanopore测序基础数据展示
    Species Reads Cells total_Gen
    es
    total_Transcrip
    ts
    Median Genes
    Per Cell
    Median Transcripts
    Per Cell
    Human 154,825,486 4,917 29,534 83,627 3509 3965

    2.单细胞二代&三代细胞分群一致性分析

    为进一步观测单细胞三代测序1 Cell是否能够满足细胞聚类及分群的单细胞分析需求,对拆分过滤后的高质量reads利用Seurat进行单细胞数据分析,结果表明:二代与三代数据细胞分群具有高度一致性;通过诺禾致源自主开发的自动化细胞定义算法的Fast-Celltype进行细胞定义,并进行细胞占比分析,结果表明:单细胞三代测序能够很好地满足细胞分群及细胞类型鉴定等分析需求
    人组织样本的二代&三代cluster一致性分析(左)、细胞定义(中)及细胞占比分析(右)

    3.isoform分析

    针对上述人的组织样本进行转录本统计:单细胞三代全长转录组测序获得29,534个基因,共鉴定出83,627个unique isoform,其中,检出新的转录本(NNC+NIC)占比35%。
    isoform分析

    4.转录本表达检测

    S100A4(S100 钙结合蛋白 A4基因)在人组织样本进行单细胞二代测序时,在各类细胞亚群中是泛表达(左图),但S100A4的转录本却是在不同细胞亚群中差异表达(中、右图),表明在isoform水平存在细胞特异性表达。
    细胞群isoform表达特异性分析

    5.融合基因检测

    人的样本可以检测出约几百条候选融合序列,并均可以归类到具体亚群中,单细胞全长转录组提供了融合基因检测的可能性,并将其与细胞亚群相关联。
    融合基因鉴定

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