1.样本寄送流程及注意事项

• 1.1新鲜组织及血液样本寄送

  （1）用组织保存液保存新鲜组织进行寄送，基本流程如下： 注：合同签订后，申请组织保存液至客户单位，寄送样本至公司（血液无需申请保存液）
  邮寄样本前需发邮件给邵海燕shaohaiyan@novogene.com，抄送scrna-sp@novogene.com，样本制备预警邮件发送模板指南如下：有流式细胞分选需求，需在备注中注明分选要求 （2）组织保存液寄送样本
    客户收到组织保存液后（见STEP2图），组织保存液应在4℃条件下保存（效期6个月，有沉淀/冻融后不可使用），切勿冻存；
    寄样时，先将样本放入装有组织保存液的储存管中，组织尽量无菌放入液体中，组织保存液应当浸没组织，然后迅速盖紧加封口膜包装好。
    组织保存液寄送样本小Tips：
    Step1、首先准备一个泡沫箱和适量冰袋，注意请勿使用-80℃冰箱冰袋用于邮寄样本
    Step2、标明样本名称，用适量的塑料泡沫对装有组织的保存液管进行包裹
    Step3、确保管子包裹完好
    Step4、用保鲜膜或者胶带封好
    Step5、置于冰袋上，保证不和冰袋直接接触
    Step6、找一些填充物进行填充，确保样本在其中不会过多震荡
  注意：寒冷天气下，可借助保温桶等设备防止组织结冰；胰腺类样本注意申请特殊组织保护液（申请时备注即可）； 图1 组织保存液寄送样本小Tips   大于0.2g实体瘤组织（如需进行流式分选，根据分选的要求样本量通常要大于0.6g，具体个性化分选需求的组织用量可同后台沟通，送样同时现阶段需客户提供流式相应的抗体，后期公司可提供常用抗体），保护液能完全浸没组织为宜，一般样本1mL可保证浸没； 图2 组织保存液浸润样本示例   血液（全血）/骨髓血样本置于EDTA抗凝管中，人4mL（特殊治疗/疾病需6mL，冻存PBMC细胞量需5×10⁶ cells），鼠1-2mL；目前除了人和小鼠的血液样本可以制备PBMC/BMMC之外，其余物种均需要联系诺禾进行评估。
    如样本量足够建议首次寄送时同一样本2-3管重复，以防万一；
    客户需标明：样本名称，组织类型，离体时间，浸入组织保存液时间；
    寄送时装有样本的储存管不能和冰袋直接接触，需用泡沫包裹，保证4℃左右的低温环境；
    冰袋寄送（注意不要选择干冰），务必保证在48小时内到达北京、天津、广州、上海或成都、杭州的单细胞样本接收室。
    新鲜组织送样量

  常规组织	常规肿瘤、器官组织等	绿豆		达到0.08g可以尝试有风险，细胞量可能偏少。
  		黄豆		正常，可以尝试，细胞量通常可以达到上机要求。 坏死类需适量提高送样量。
  		花生		正常，可以尝试，细胞量通常十分充足。 坏死类需适量提高送样量。
  	腺体类肿瘤及癌旁（例乳腺、胰腺、肝脏、肾脏、肠道、性腺、卵巢、垂体等）	花生		正常，可以尝试，细胞量通常十分充足，最少0.6g（3粒黄豆大小）。 胰腺类注意申请特殊组织保护液（胰腺/胰腺癌）。
  皮肤类	皮肤	花生壳		正常：要求送样量达到1g为宜，组织量大约为一个花生壳大小(1cm*2cm)。 疾病、坏死、角质化严重：要求送样量为正常的2倍，约2g，2cm*4cm。
  脑组织类	脑	花生		人：400mg。 小鼠（成年）：半脑。
  骨组织样本	软骨类	花生		软骨组织需要1g（一颗中等花生米大小）以上的组织量，达到送样量通常消化后细胞量充足。
  	硬骨类	成人中指指甲大小（2-3块		硬骨组织需要10g以上的送样量，可事先用骨钳将组织处理成1cm*1cm左右的小块（10g大约2.5-3块左右），达到送样量通常消化后细胞量充足。
  血管类	人主动脉、肺动脉及静脉	花生壳		动脉：要求送样量达到1g为宜，组织量大约为一个花生壳大小(1cm*2.5cm)。 静脉：要求送样量为动脉的2倍，约2g，2cm*5cm。
  	小鼠血管	2根		数量若干根，总量达到6cm为宜。
  体液类、冲洗液类	脑脊液、胸水、腹水、滑膜液、肺泡灌洗液	15-50mL		送样建议：无菌取样，提取体液后，直接放入15ml或者50ml离心管中；冲洗液类建议100mL以上。并做好标记。由于此类样本细胞得率低，建议尽可能多提供。 样本寄送：置于4℃环境进⾏保存运输。
  其他类型	穿刺样本	直径1mm穿刺条（大致曲别针粗细）		长度>2cm，可以尝试，细胞量无法保证； 2cm>长度>0.5cm，有一定风险，可以尝试，细胞量有可能无法达到上机要求； 长度<0.5cm∶高风险，不建议送样。
  	小鼠十二指肠绒毛	建议2cm长度		一只成年小鼠全部十二指肠绒毛 组织要求：切除十二指肠，将肠内容物轻轻冲洗干净，待到制备前打开肠道，刮下绒毛。 运送时间：最好在6h内制备并上机。不建议寄送。
  	鼠类胰腺	如图组织量可以制备千万级细胞		一只成年小鼠，细胞量足够 组织要求：干净的胰腺，剔除肠系网膜。 运送时间：最好24h之内。 注意申请特殊组织保护液（胰腺/胰腺癌）

  备注：由于穿刺类样本的特殊性，建议使用一般14或16G穿刺针，且均按照风险样本对待。

• 1.2新鲜细胞悬液仅适用于同城寄送

  （1）客户自选缓冲液需注意选用无钙、镁、EDTA等影响酶活性物质，官方推荐含0.04% BSA的PBS;
  （2）细胞量尽量保证在1×10⁶cells以上;
  （3）如需流式分选，分选后目的细胞尽量保证在1×10^5cells以上（寄送前提前联系）；
  （4）冰袋寄送（注意不要选择干冰）， 寄送时装有样本的储存管不能和冰袋直接接触，需用泡沫包裹，保证4℃左右的低温环境； （5）寄送时间小于2小时

• 1.3冻存细胞干冰寄送

  （1）客户冻存细胞寄送方法 1）分离的细胞梯度冻存（程序降温仪或者异丙醇-80℃过夜后液氮保存）；建议冻存密度3-6×10^6cells /mL(管)，每管1mL；如细胞量足够建议首次寄送时同一样本2-3管重复，以防万一；
  2）将液氮保存的细胞，干冰寄送，干冰量需充足；
  3）寄送前发送邮件给邵海燕，抄送单细胞样本制备群邮箱“scrna-sp@novogene.com”；主题：XX项目细胞复苏制备预约，邮件中写明合同信息、客户单位、样本名称、样本个数、细胞类型、实验类型，确保送到时可以直接进行复苏及单细胞捕获建库；
  4）细胞复苏后活率大于75%将直接进行上机，活率小于75%的细胞诺禾不建议上机；如样本珍贵，和客户沟通后，由客户决定是否上机。
  注：细胞冻存请使用专用的细胞冻存管；建议首次寄送预实验时同一处理（每一个重复）送 2-3 份样本，以做备选；
  （2）细胞冻存方法（如客户细胞尚未冻存，可提供如下冻存方法）
  1）将制备好的单细胞悬液离心（300-500g，5分钟，4℃），去上清，细胞缓冲液重悬后计数（浓度700-1200 cells/μL），调整细胞总量5-10×106cells（冻存细胞风险较大，如需流式需提前跟客户说明风险）；
  2）备注：客户实验室需备台式冷冻离心机（水平转子15mL离心管适配器）；注意试剂和仪器无菌，操作过程要求无菌操作；
  3）对于活性大于80%的细胞进行离心（300-500g，5分钟，4℃），去上清，加入冻存液，重悬细胞，然后将1mL细胞悬液加入到细胞冻存管中，拧紧盖子；
  4）将细胞冻存管放到程序降温盒中（推荐异丙醇冻存盒）；将程序降温盒放入到-80℃，24小时后选择干冰寄送或者液氮保存；
  5）干冰寄送：将细胞冻存管放到干冰中，冻存管做好标记（样本名称、冻存时间、客户单位、姓名），选择干冰15-20公斤（夏季可以适度增加）。
  

• 1.4冻存组织寄送（液氮速冻组织寄送抽核处理）

  冻存组织基本流程如下： （1）寄送前发送邮件预约实验；
        寄送前销售发送邮件给邵海燕，抄送单细胞样本制备群邮箱“scrna-sp@novogene.com”；
  邮件发送模板参考单细胞组织样本到样预警模板
  （2）组织样本要求：
        一般组织建议0.2g-0.5g/管（如需进行流式分选，0.6-1g/管，不同组织有差异），组织液氮速冻，如样本量足够建议首次寄送同一样本2-3管重复，以作备用
        若穿刺样本量少，则不质控直接抽核，需要提前告知客户风险性
  （3）干冰寄送至天津实验室，收样人为样本组，需要录样，确保干冰量充足
  （4）10x官网建议：在整个实验过程中RNA酶抑制剂浓度是1U/μL
  风险提示：抽核后质控为显微镜观察，非定量判断，有一定误差；另外非哺乳动物细胞文献及标准比较少，对于单核测序来说，存在风险；请客户知悉。

• 1.5植物样本寄送

  （1）植物样本要求 植物类样本支持原生质体制备与植物抽核制备，均需寄送活株。 寄送过程中可以使用木架固定培养瓶及幼苗，以保证运输途中植物完整性及状态的稳定性。
  制备的目标组织量建议>2g，幼嫩组织优先，木质含量高的组织类型成功率不稳定，需客户知悉。
  （2）关于特殊样本类型
  含淀粉样本（如甘薯、人参、三七、马铃薯等）无法进行原生质体制备，只能抽核处理； 对于抽核类样本，如样本涉及真菌侵染、细菌处理、病毒、虫害等处理，需要确认样本详细情况，是否存在寄生/残留，如有残留/寄生，则无法通过流式进行核悬液的纯化实验。

• 1.6类器官组织寄送

  送样建议：类器官细胞得率低，建议尽可能多提供，或进行预实验测试细胞得率
  （1） 悬液类样本量：大于2x10⁶ cells
  （2） 离心后的沉淀样本量：黄豆大小，建议大于0.2g
  （3） 新鲜样本寄送过程中建议使用类器官的完全培养基，冰袋寄送或同城闪送（推荐），48h寄送到诺禾单细胞实验室
  （4）冻存组织建议尽量去除类器官培养基，液氮速冻
  （5） 需提前确认类器官是否含有支架，如含支架，需提供支架材料的溶解方案或试剂

• 1.7动物样本寄送

  （1）常规样本
  对于常规动物组织样本、血液等，上机要求和单细胞转录组捕获上机质检标准一致，寄送要求同2.1-2.4送样建议；
  其中血液（全血）/骨髓样本，如需制备PBMC/BMMC，除人和小鼠之外，其余物种均需要联系诺禾进行评估。
  （2）非常规样本
  对于非常规样本，诸如鱼类、贝类等，建议进行活体寄送，放置在养殖液体中，充氧寄送至天津实验室。（解剖需老师协助）

• 1.8 FFPE样本寄送

  （1）石蜡块：优先建议提供石蜡块（带卡槽），要求被包埋组织横截面积>0.5cm2，蜡块密封后冰袋寄送
  （2）石蜡卷：要求石蜡卷现切现用，先送质检样本，质检合格后再送正式样本
  质检样本要求：5µm厚度5-6卷，现切现用（7天之内），置于EP管内，密封后冰袋寄送；
  正式样本要求：25um厚度4-6卷，现切现用（7天之内），每两张石蜡卷，置于一个1.5ml EP管内，密封后冰袋寄送，切片厚度不可减小，需保证石蜡卷完整性；
  FFPE样本寄送至天津单细胞实验室，质检样本/正式样本均需要制备预警邮件，并附件FFPE样本基本信息，如FFPE样本寄送至样本组，务必备注样本放于4℃，切勿放在-80℃
  

• 1.9体液类/冲洗液类样本寄送

  （1）送样建议：无菌取样，提取体液后，直接放入15ml或者50ml离心管中，冲洗液类建议100mL以上。并做好标记。由于此类样本细胞得率低，建议尽可能多提供。
  （2）样本寄送：置于4℃环境进⾏保存运输。

2.样本寄送信息

3.注意事项