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送样建议

非编码转录组

声明:
实验室不接收《人间传染的病原微生物名录》(点击查看)的所有样品。对于高毒性动植物等样品,必须事先通过销售、客服或运营经理与诺禾致源技术人员联系,确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。
提取风险提示和注意事项:核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系,尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响,因此较难保证单次提取满足质量要求,客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸,请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本,建议自行提取。取样过程中,需要全程佩戴手套,并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒,以免样本污染

1.非编码转录组

  • 1.1 组织样本

    a. 植物组织:
    • 成熟部位,例如植物茎、根、种子等部位建议2倍以上送样
    • 需要清洗的样本,可以无菌水或75%乙醇冲洗表面,吸水纸吸干
    • 样本离体后,在冰上立即分割50-100mg小块,2-3管备份,放置冻存管并立即液氮速冻,放置-80℃保存,避免未经速冻直接放-80℃保存
    • 不建议使用RNAlater等RNA保护试剂保存植物组织样品;因为植物细胞含有细胞壁,RNA保护试剂很难渗透
    • 不建议使用TRIzol保存;TRIzol法并不适用于萃取大多数植物样本,植物组织中的RNA提取多采用专门的提取试剂盒,而TRIzol保存会影响试剂盒提取液的提取效果
    b. 动物组织:
    • 对于动物组织,建议选用新鲜样本,采集样品时应选取核酸含量较多的部位;核酸不丰富部位, 例如脂肪、成熟皮肤、骨头等部位建议酌情增加送样量
    • 生理盐水漂洗;剔除结缔组织等非研究组织
    • 样本离体后,在冰上立即分割50-100mg小块,2-3管备份,放置冻存管并立即液氮速冻,放置-80℃保存,避免未经速冻直接放-80℃保存
    • 无法及时用液氮速冻保存的样本,可采用RNAlater等RNA保护液进行送样,注意完全按照 RNA保护液操作,尽量使组织块尺寸保持在5mm左右,过小不利于样本收集,过大则保护液不能均匀的渗透到组织。切记不可先-80℃冻存后取出放入RNAlater浸润
    • 动物样本可加裂解液(TRIzol,或其他同TRIzol使用方法一致的裂解液);如果使用TRIzol裂解液保存送样,请务必先进行液氮研磨破碎,然后溶于TRIzol中液氮速冻;-80℃保存
    c. 细胞样本
    • 生长状态良好的悬浮细胞或贴壁细胞
    • 悬浮细胞:每5×106个细胞(非送样量)加入1ml TRIzol试剂,用枪头反复抽打细胞,直至看不见成团的细胞块,整个溶液呈清亮而不粘稠的状态;转移到的离心管中,液氮速冻,放置-80℃保存
    • 贴壁细胞按每10cm2培养面积(相当于六孔板一个孔或35mm直径培养皿)加1ml TRIzol试剂;用枪头反复吹打,使TRIzol接触所有长有细胞的培养瓶表面,并进行充分消化,反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块,转移到离心管中,液氮速冻,放置-80℃保存
    • 此外,也可将细胞用PBS缓冲液快速洗一次,离心之后收集得到细胞沉淀,液氮速冻,放置-80℃保存
    d. 血液样本:
    • 血液相关的产品只接全血或分离的细胞样本,不接血清/血浆
    • 全血样本建议用BD管保存,small、circRNA不建议送TRIzol血液和速冻血液,提取效果不好,总量和RIN值不易达标
    e、菌体:
    • 建议收集液体培养基中对数生长期的菌体
    • 通过低速离心收集菌体并尽可能将培养基去除干净,然后用无菌水或PBS缓冲液冲洗样品1~3遍,送菌液沉淀
    • 不建议用RNAlater保存,因为RNAlater密度较大,取时不易分离菌体
    • 不建议加入裂解液,细菌的提取一般使用试剂盒
    • 不建议加TRIzol,影响菌体裂解
    样本类型 Lnc RNA Small RNA Circ RNA 两库全转 三库全转

    新鲜植物组织干重

    叶片、花≥0.2g;根、茎、种子等其他组织≥0.7g

    叶片、花≥0.8g;根、茎、种子等其他组织≥2g

    叶片、花 ≥0.8g;根、茎、种子等其他组织≥2g

    ≥1.5g(成熟部位,例如植物根、茎、种子等部位建议2倍以上送样) ≥2.3g(成熟部位,例如植物根、茎、种子等部位建议 2 倍以上送样)

    新鲜动物组织干重

    内脏组织、脑组织≥0.2g;脂肪、皮肤、骨头、血管等其他组织≥0.4g

    内脏组织、脑组织≥0.5g;脂肪、皮肤、骨头、血管等其他组织≥2g

    内脏组织、脑组织 ≥0.5g;脂肪、皮肤、骨头、血管等其他组织≥2g

    ≥0.9g(成熟部位,例如植物根、茎、种子等部位建议2倍以上 送样) ≥1.4g(成熟部位,例如植物根、茎、种子等部位建议2倍以上送样)

    新鲜培养细胞

    ≥5*106 ≥1*107 ≥1*107 ≥2*107 ≥3*107

    新采集的全血 (加入 TRIzol)

    ≥6mL ≥8mL ≥10mL ≥14mL >24mL
    新采集的全血 (液氮速冻) >3mL - - - -
    PA*gene 采血管 ≥2管 ≥2管 ≥2管 ≥4管 ≥6管
    菌体 >5*106
    >0.3g
    >1*107
    >0.5g
    >1*107
    >0.5g
    >2*107
    >0.8g
    >3*107
    >1.3g

  • 1.2 核酸样本

    a. 使用无RNA酶水溶解(EB或者其他溶剂可能对建库过程中的酶反应有影响)
    b. small RNA送样,提取总RNA时建议不要使用过柱试剂盒,也不要使用LiCl沉淀,以免丢失小片段RNA。如果直接提供small RNA样品,可以使用small RNA提取专用试剂盒来进行提取
    c. 不可用TRIzol溶解送样,否则需要再提取一次
    d. RNA样本提取可采用RNA试剂盒、Tirzol或CTAB法,注意RNA样本的纯化,避免多糖多酚、蛋白和其它杂质的残留。提取完成后,提供Nanodrop、AGE或Agilent 2100中一种或多种形式的分析结果以判断RNA的完整性、浓度、总量是否满足建库需求。检测后的RNA置于-80°C冰箱保存,用大体积干冰运输,并保证样本到达签收地开箱时有干冰剩余
    e. 寄送Total RNA的需注明提取所用的方法,如试剂盒或Tirzol法等
    样本类型 Lnc RNA Small RNA Circ RNA 两库全转 三库全转
    核酸

    浓度:50ng/uL
    体积:20ul≤V≤120ul
    总量:≥1ug

    浓度:50ng/uL
    体积:20ul≤V≤120ul
    总量:≥2ug
    浓度:50ng/uL
    体积20ul≤V≤120ul
    总量:≥2ug
    浓度:50ng/uL
    体积:20ul≤V≤120ul
    总量:≥3ug
    浓度:50ng/uL
    体积20ul≤V≤120ul
    总量:≥5ug
    因部分客户核酸含有杂质、颜色等物质导致会产生大量损失,为保证您的样本一次检测合格并节约宝贵的重送样时间,送样建议量是高于公司判定标准的,请您在核酸量足够的前提下尽量按照送样建议来送样,感谢您的大力支持与配合。

2 样本打包及寄送建议

  • 2.1 样本的打包

    (1)核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品,并用封口膜封口。为了防止样品管破裂,或者污染和混乱,请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备,还请在送样前自行转管处理。
    (2)组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品,并用封口膜封口。
    (3)为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂,最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中,并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中,并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品,为防止运输中受挤压破损,建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中,在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
    (4)对于血液样品,建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载,为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏,需要将每支采血管管身均用气泡垫包好,然后放置到塑料或纸质包装盒中。
    (5)用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出,建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
    (6)为便于处理和保存,组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍(特殊的得率较低的样品除外)。
  • 2.2 样本的名称标识

    (1)所有的样品必须具有清晰的标记,并且简洁明了。
    (2)使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称,并将锡箔纸放在自封袋中,自封袋外面再标记上样品名称,防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
    (3)使用乙醇沉淀的核酸样品,由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊,建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上,然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上,并缠绕2-3圈。
    (4)样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。

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