二代RNA文库类型送样建议-诺禾致源

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二代RNA文库类型

1. 宏转录组
- 1.1 组织样本
- 1.2 核酸样本

声明：
诺禾致源拒绝接收《人间传染的病原微生物名录》（点击查看）中危害程度为第一、第二类的高致病组织、血液、细菌等样品，只接收提取得到的核酸样品。危害程度为第三、第四类的致病性或传染性的组织、血液、细菌等样品，必须事先通过销售、客服或运营经理与诺禾致源技术人员联系，确定无高致病性和传染性后才能寄送样品，此时需注意：
1.样品寄送时应采用WHO提出的三级包装系统，第一层容器：装样品，要求防渗漏；第二层容器：要求耐受性好、防渗漏，容纳并保护第一层容器；第三层容器：运输用，最外层包装。
2.在第二层包装注明“致病性样品，接收时请注意”字样，并在样品信息单上注明其危害程度及接收注意事项。此类样品寄送时请第一时间联系销售或运营经理，并务必邮件通知样品组，告知样品组相关寄送信息（快递单号、样品类型、样品数量）以及接收时的防护措施和注意事项。
3.提取风险提示和注意事项：核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。取样过程中，需要全程佩戴手套，并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒，以免样本污染。

1.宏转录组

1.1 组织样本
a. 肠道内容物/粪便样本≥1g • 液氮速冻，-80℃保存，干冰运输
• 不建议TRIzol保存，不建议RNAlater保存
• 不建议送粪便上清液 b. 菌体>5*10⁶个/> 0.5g • 如为液体培养基，需13000xg，10min离心后去除上清，液氮速冻15min
• 如为贴壁菌，可PBS将菌体冲下来，放入离心管，13000xg，10min离心后去除上清，液氮速冻15min c. 滤膜≥5张 • 过滤后，分离滤膜，去除滤膜周边白色，一张一张塞进50ml离心管，液氮速15min，-80℃保存，干冰送样；如果老师有设备条件，可以用高速离心代替滤膜过滤，具体方法：4℃ 13000rpm 10min，弃上清，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输
• 直接冻滤器送样的话，冻存不彻底。不建议加保护液：不建议放RNAlater处理，因为滤膜富集的多为细菌和真菌，用RNAlater之后不好分离；不建议用TRIzol处理，因为细菌未经破壁直接用TRIzol提取是无法完全裂解的，会影响后续的提取效率
• 提取的时候改冲洗滤膜为研磨滤膜，得率会有所提高 d. 污泥≥1g • 放入冻存管，离心去上清后液氮速冻15min，-80℃保存，干冰运输 e. 新鲜植物组织干重≥ 0.8g • 放入冻存管，离心去上清后液氮速冻15min，-80℃保存，干冰运输
• 成熟部位，例如植物茎、根、种子等部位建议2倍以上送样；如组织表面有异物请处理干净后送样 f. 新鲜动物组织干重≥0.5g • 放入冻存管，离心去上清后液氮速冻15min，-80℃保存，干冰运输
• 核酸不丰富部位，例如脂肪、成熟皮肤、骨头等部位建议酌情增加送样量 g. 新鲜培养细胞≥1*10⁷ 注意上标问题 • 放入冻存管，离心去上清后液氮速冻15min，-80℃保存，干冰运输
• TRIzol裂解10min，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输
1.2 核酸样本
• 体积：20ul≤V≤50ul；总量：≥500ng
• 使用无RNA酶水溶解（EB或者其他溶剂可能对建库过程中的酶反应有影响）
• 不可用TRIzol溶解送样，否则需要再提取一次
• 提取完成后，提供Nanodrop、AGE或Agilent 2100中一种或多种形式的分析结果以判断RNA的完整性、浓度、总量是否满足建库需求。检测后的 RNA 置于-80°C冰箱保存，用大体积干冰运输，并保证样本到达签收地开箱时有干冰剩余