一、支持样本类型

二、送样建议

• 样本类型	送样量/样	保存条件	运输条件
  FFPE 组织块	组织厚度大于1mm，面积＜0.9mm*0.9mm	密封后，4℃保存	冰袋运输
  FFPE 石蜡片	RNA质检样本：50um总厚度的石蜡卷 正式样本：5um厚相邻切片4-6张未贴片的石蜡片	新切切片，使用小毛刷或镊子将单张蜡片送进全新的 50 mL 离心管中并盖紧罐盖；干燥密封，4℃保存时间＜14天	冰袋运输

  1.FFPE蜡块送样要求

  蜡包埋块密封后4℃保存，冰袋寄送（蜡块建议一年以内，以质检结果DV200为准）。
  建议组织截面积尽量不要超过所选的芯片捕获框规格，即< 9mm*9mm
  ※ FFPE样本制备方法建议见附件3：石蜡块组织包埋方法。
  

2.FFPE蜡片送样要求

• 1）RNA质检送样要求

  ① 根据样本大小，每个样本首先需要切5-10张10 μm厚度蜡卷，即总厚度≥50um（穿刺样本至少10张，100um厚），每个样本的蜡卷放入一个单独的1.5mL离心管中，使用封口膜密封后，冰袋干燥寄送至公司进行Angilent 2100质检DV200值（DV200——长度大于200bp的核酸占比）；
  ② 同时将每个样本贴一张白片（建议使用粘附性载玻片贴片，切片厚度5μm，选取正式切片的相邻切片, 42℃烤片3h），寄送至公司进行H&E染色，找出目的区域，如您在实验室已经自行切片染色，确认后续正式样本中存在感兴趣的目标区域，可无需寄送白片。
  Notice：质检样本量过少，可能导致质检结果假阴性

  2）正式建库蜡片送样要求

  切片：按照组织切片要求，选取的蜡片需平展，能顺利展片，无需修片
  Notice：注意不能褶皱过多、破碎，可在蜡片运输前展片测试，如不能成功展片，不建议寄送此蜡片。
  
  b. 送样：使用小毛刷或镊子将单张蜡片送进全新的 50 mL 离心管中并盖紧罐盖； c. 密封保存：在50mL离心管外标签处写上样本名称和日期，装入自封袋并放入干燥剂密封保存。预防发生损耗，同一样本可一次运输4-6张蜡片。

• Notice：每个管子只能放置一张蜡片，4-6蜡片需分4-6个离心管单独放置保存。

三、保存及运输

附件1：石蜡块组织包埋方法

• 组织处理

石蜡切片用组织处理的步骤

• 1. 获取新鲜标本

  新鲜组织标本有各种来源。应当注意的是，在从患者或实验动物身上取下时，它们很容易发生自溶。请务必在取下后尽快小心处理和适当固定。理想情况下，应在切除后，立即固定；如无法立即固定，也应在组织离体后，30分钟以内完成组织固定。

• 2. 固定

  将标本放入10-15倍于组织块体积的液体固定试剂（固定剂）中，推荐10% NBF （中性甲醛缓冲液）或 4% PFA（多聚甲醛）。固定剂将缓慢渗透组织，导致组织变硬，使组织中的核酸和蛋白质发生交联，便于长期保存，也可使组织免受后续处理步骤的影响。理想情况下，标本应保留在固定剂中足够长时间，以让固定剂能够渗透到组织的每个部分，然后再额外保留一段时间让固定化学反应达到平衡（固定时间）。通常，这意味着标本应该固定 6-24 小时（一般4 mm厚度以内的组织固定时间不宜超过24小时，固定时间过长，可能会影响后续基因检出结果）。
  固定后，待处理的标本将放在合适的贴标包埋盒（小孔篮）中，以便将其与其他标本隔离开。
  



• 3. 脱水

  熔化后的石蜡有疏水性（不可与水混溶），因此在浸蜡前，必须去除标本内的大部分水。一般通过将标本浸入一系列浓度渐增的乙醇（酒精）溶液直至达到纯净无水乙醇来进行这个过程。乙醇在所有比例下均可与水混溶，因此，标本中的水逐渐被乙醇替代。使用一系列渐增的浓度来避免组织过度变形。
  对于厚度不超过 4mm 的标本，一般的脱水顺序为：（不同大小和类型的组织脱水条件均有不同，建议根据以往的组织类型处理经验调整浓度梯度和处理次数）
  1）70% 乙醇 15 分钟
  2）90% 乙醇 15 分钟
  3）100% 乙醇 15 分钟
  4）100% 乙醇 15 分钟
  5）100% 乙醇 30 分钟
  6）100% 乙醇 45 分钟
  此时，除了微量残留的强结合（分子）水外，应去除标本中所有的水。



• 4. 透明

  虽然组织现在基本上已经没有水分，但组织仍然无法被石蜡浸润，因为石蜡和乙醇很大程度上不混溶。因此，需要使用一种溶剂替换组织中的乙醇（一般选择使用二甲苯），然后二甲苯又能被熔化的石蜡取代。该过程中的这个阶段称为“透明”，选择“透明”一词，是因为许多（并非全部）透明剂会给组织带来透光或透明效果。透明剂的另一个重要作用是去除组织中的大量脂肪，否则脂肪会阻碍浸蜡。
  对于厚度不超过 4 mm 的标本，一般的透明的处理顺序为：
  1）二甲苯 20 分钟
  2）二甲苯 20 分钟
  3）二甲苯 45 分钟



• 5. 浸蜡

  一般选用组织学实验专用石蜡，熔点为55℃~60℃，在此60℃下可浸润到组织中，然后冷却到 20°C，使其凝固。组织学专用石蜡是纯化石蜡和各种添加剂（可能包括树脂，如苯乙烯或聚乙烯）的混合物，具有非常特殊的物理特性，可使经蜡浸润的组织便于切成极薄的切片，并保留充分的弹性，并在温水浴上漂浮过程中完全变平。
  对于厚度不超过 4 mm 的标本，一般的浸蜡处理顺序为：
  1.蜡 30 分钟
  2.蜡 30 分钟
  3.蜡 45 分钟



• 6. 石蜡包埋

  使用包埋模具进行组织包埋，模具内填充有熔化的蜡和标本。在模具中要非常小心地定向标本，因为它的放置方向将决定“切片平面”，这是空间转录组后续实验的重要考虑因素。 将一个包埋盒（小孔蓝）放在模具顶部，加上更多的蜡，将整个组织块放在冷凝板上固化。完成这个操作时，带有附上的包埋盒的组织块可从模具中取出。
  
  

附件2：送样地址